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ubiquitination原理 在 コバにゃんチャンネル Youtube 的最讚貼文
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Ubiquitination is an enzymatic post-translational modification in which a ubiquitin protein is attached to a substrate protein. ... <看更多>
ubiquitination原理 2023-精選在Youtube/網路影片/Dcard上的焦點新聞和熱門話題資訊,找ubiquitination原理在Youtube上2023年該注意什麼? ... <看更多>
#1. 泛素- 維基百科,自由的百科全書
泛素(英語:ubiquitin)是一種存在於大多數真核細胞中的小蛋白。它的主要功能是標記需要分解掉的蛋白質,使其水解。當附有泛素的蛋白質移動到桶狀的蛋白酶的時候, ...
#2. 溶體之外-談泛素與蛋白質的降解 - 科學Online
泛素是一種由76 個胺基酸所組成的小型蛋白質,廣泛存於真核生物和古細菌,故被稱為「ubiquitin」 (源自拉丁文ubique, everywhere之意)。研究發現在細胞 ...
泛蛋白(ubiquitin)是一種小分子酸性蛋白質,其分布甚廣,從細菌到哺乳類動物體內都有。它的主要功用在於將細胞質中即將被分解的蛋白質予以標示,然後把有標記的蛋白質 ...
#4. PROTACs 藥物開發工具:E3 Ligase Binding Assay Kits
在泛素化(ubiquitination) 過程中,E3 連接酶(E3 ligase) 肩負著辨識目標蛋白質以及將E2 酵素所攜帶的泛素轉移銜接至目標蛋白質的重要功能。蛋白水解靶向 ...
在体外与K63- or K48-linked ubiquitin chain petides孵育,然后通过SDS电泳并用泛素化抗体进行检测。这一方法可以明确要研究的蛋白哪个赖氨酸残基容易发生泛素化。
#6. 【科普】关于Ubiquitination - 知乎专栏
Ubiquitination 是post-translation中重要的一项。 它最被人熟知的功能就是可以引导 ... 那么ubiquitination标记的原理是什么呢? Ubiquitination 过程.
#7. 蛋白質
蛋白質分離與純化的原理. 分離的原理. - 利用蛋白質的分子量大小、帶電 ... 泛素(ubiquitin)標記的蛋白質(ubiqutination)被26S. 蛋白質降解體*辨識並分解,需ATP及多種 ...
#8. 亲和分离在蛋白质泛素化修饰研究中的应用进展- PMC - NCBI
Ub: ubiquitin. 生命分离分析新原理和新方法为蛋白质泛素化结构和功能探测提供了重要突破口。亲和分离技术是基于生物分子之间特异性相互作用发展而来的,广泛用于亲和 ...
#9. 營養師考試生理生化解析出處100年第一次國考 - 隨意窩
一、請敘述疫苗免疫之原理。 (10分) · 二、請敘述肝臟的生理及代謝功能。 (15分) · 三、泛素化(ubiquitination)是細胞的一種自我管控蛋白質的手段,請說明 · 四、胰島素( ...
#10. 磷酸訊號傳遞路徑研究不煩惱,Phosphorylation Array幫你一天 ...
(Glycosylation)、泛素化(Ubiquitination)、甲基化(Methylation)、乙烯化(Acetylation)、硝基化 ... 此實驗原理與Western Blot. 相同,將樣本加入coating 有不同抗體 ...
#11. 產業觀點/PROTAC技術催生重磅新藥 - 中華民國學名藥協會
PROTAC的原理是利用雙靶點小分子藥物,一頭結合目標蛋白,一頭結合E3泛素 ... 酶會將目標蛋白接上泛素(ubiquitin)修飾,被泛素化(ubiquitination) ...
#12. 如何運用細胞機制改善脂肪肝?先來認識什麼是泛素與細胞自噬
細胞內的蛋白質零件如有損壞,就需要分解與回收,主要依靠各有所長、也能互補的兩套回收系統:一套是「泛素─蛋白酶體系統」(ubiquitin-proteasome ...
#13. 【Proteintech】Western Blot (WB) 實驗結果真相大解析
Western blotting 是檢測蛋白質表現量的實驗方法,利用抗體與蛋白質抗原專一性結合的原理,通過訊號表現和成像的位置分析,獲得目標蛋白質 ... 泛素化(Ubiquitination).
#14. 蛋白質表達與純化的使用秘訣:蛋白標籤(Protein Tag)與標籤 ...
Immune Checkpoint · Coronavirus antigens · SARS-CoV-2 antigens · Ubiquitination related reagent · CAR-T Cell Therapy Targets ...
#15. Ubiquitination of Proteins and Protein Degradation - YouTube
Ubiquitination is an enzymatic post-translational modification in which a ubiquitin protein is attached to a substrate protein.
#16. ubiquitination原理2023-精選在Youtube/網路影片/Dcard上的 ...
ubiquitination原理 2023-精選在Youtube/網路影片/Dcard上的焦點新聞和熱門話題資訊,找ubiquitination原理在Youtube上2023年該注意什麼?
#17. CAS#1357389-11-7/1396841-57-8 APExBIO 貨號A8803
... 酶(DNMT) 的DNA 甲基化和組蛋白的共價修飾,例如乙醯化(acetylation)、甲基化(methylation)、磷酸化(phosphorylation)和泛素化(ubiquitination)。 ... 原理與知識.
#18. 透過靶向血管內皮細胞的機械敏感性蛋白 ... - 全國碩博士論文網
基本原理動脈彎曲和分叉處的擾流會激活內皮細胞,進而造成動脈粥狀硬化。 ... 中重要的轉錄因子HSF1的泛素化(ubiquitination)以及蛋白酶體(proteasome)媒介的降解, ...
#19. 樟芝防治癌症之重要機轉與特色-癌症逆轉
其原理是先在要擴增的DNA 片段兩端分別設. 計一個前置引子(forward primer)和反置引子(reverse ... 是利用ubiquitin proteasome pathway 將p53 蛋白水解,當細胞正常功.
#20. Novel FOXF1-Stabilizing Compound TanFe Stimulates Lung ...
... protein-protein interactions and decreased ubiquitination of the FOXF1 ... 基本原理:肺静脉错位的肺泡毛细血管发育不良(ACDMPV) 与FOXF1 ...
#21. 检索-台州学院图书馆
双钙钛矿卤化物Cs2AgFeX6(X=Cl, Br, I)电子结构和光学性质的第一性原理研究 ... its main derivatives enhanced growth of endometrial cancer via p53 ubiquitination.
#22. 检索-重庆大学图书馆
双钙钛矿卤化物Cs2AgFeX6(X=Cl, Br, I)电子结构和光学性质的第一性原理研究 ... its main derivatives enhanced growth of endometrial cancer via p53 ubiquitination.
#23. 講座摘要
... 如何利用它們去高效調控腫瘤微環境,實現重大疾病智慧化治療的新原理與新方法。 ... tRNA-regulated FBXO22-mediated mTOR ubiquitination and amino acid sensing
#24. 三角關係 - 騰達行
包括acetylation、phosphorylation、methylation 以及ubiquitination。 ... 原理. 設計與目標RNA 互補具有biotin 標記的兩組capture oligos ( 奇數與偶數組),再以 ...
#25. 血管新生動物模式之介紹楊家欣副教授
Epidermal growth factor receptor (EGFR) ubiquitination as a mechanism of acquired resistance escaping treatment by the anti-EGFR monoclonal antibody ...
#26. 建構Securin 蛋白質交互作用網絡Construction ... - 國立交通大學
係,APC 辨認蛋白後會將其以ubiquitin 標定,使走向分解路徑。C 端則為 ... 免疫沉澱是測定蛋白質之間交互作用常用的方式,實驗的原理是在細.
#27. 【深医讲坛第17讲简讯】Ubiquitination- or acetylation ...
邱小波教授首先介绍了泛素化修饰和蛋白酶体的结构与功能,深入解析了泛素非依赖的新型蛋白酶体降解通路的工作原理及其在生殖发育过程中作用。
#28. Protein degradation strategy based on ubiquitination pathway
Then, the protein would be degraded via the ubiquitin-proteasome ... 纵观AID、deGradFP 等方法的研究报道,其靶向降解作用的原理其实也是靶向 ...
#29. 日夜交替調控果蠅腦內泛素化及蛋白質體
et al. (2018) Ubiquitylation dynamics of the clock cell proteome and TIMELESS during a circadian cycle. Cell reports, 23(8), 2273-2282. 為了確認透過質譜儀辨識的 ...
#30. 第三章質譜技術與蛋白質體學Mass Spectrometry and Proteomics
出發點,介紹質譜儀的硬體設備、運作原理及蛋白質的鑑定技術,並簡介質譜技術 ... 某些蛋白質的泛素化(ubiquitination)決定其是否進入分解路徑,因此純化特定轉譯後.
#31. 100年第一次專門職業及技術人員高等考試中醫師、營養師
一、請敘述疫苗免疫之原理。(10 分). 二、請敘述肝臟的生理及代謝功能。(15 分). 三、泛素化(ubiquitination)是細胞的一種自我管控蛋白質的手段,請說明其意義及 ...
#32. TUBE (Tandem Ubiquitin Binding Entity) - ナカライテスク
しかしユビキチン鎖の結合様式(K48 や K63)は考慮する必要があります。 植物や他の種(ヒトとマウス以外)で使用できますか? 現時点では使用実績はありませんが、原理上 ...
#33. Recombinant Human Ubiquitin-associated domain ... - 华美生物
Non-catalytic subunit of the KPC complex that acts as E3 ubiquitin-protein ligase. Required for poly-ubiquitination and proteasome-mediated degradation of ...
#34. 靶标蛋白降解_产品_Promega微网站
用NanoLuc ® -BRD4和HaloTag ® -Ubiquitin质粒转染HEK293细胞,供体与受体的比例为1:100,在HaloTag ® NanoBRET™ 618 ... NanoBRET™ target Engagement Assay原理图。
#35. Anti-Multi Ubiquitin mAb(Monoclonal, FK2) | 抗体
MBLのおすすめAnti-Multi Ubiquitin mAb(Monoclonal, FK2)。 ... In the ubiquitin dependent pathway, a target protein is tagged with ... 実験の原理と方法
#36. 检索- 兰州理工大学图书馆
双钙钛矿卤化物Cs2AgFeX6(X=Cl, Br, I)电子结构和光学性质的第一性原理研究 ... its main derivatives enhanced growth of endometrial cancer via p53 ubiquitination.
#37. Screening for Cell Cycle Regulators-FUCCI Live Cells ...
荧光泛素化细胞周期指示物(Fluorescent Ubiquitination-based Cell Cycle ... 不同的洗板机由于洗板原理不同,可能会造成孔内细胞脱落,需要提前优化 ...
#38. 抑制肺癌腫瘤細胞增生的新穎小分子藥物篩選及其
膜分成兩部分,它們分別為ubiquitin-like conjugation 系統,它包括藉 ... 利用考馬斯蘭法(Bradford method) 原理。實驗於96 孔培養盤中.
#39. 最新消息|圖爾思生物科技
... 甲基化(methylation)、醣基化(glycosylation)、泛素化(ubiquitination)、乙醯化(N... 技術分享 ... 大家知道蛋白質定量服務是利用什麼技術背景以及原理嗎?
#40. K6非典型泛素化修饰研究进展 - 生物工程学报
Progress in atypical ubiquitination via K6-linkages. ... 其核心的原理是细胞内除了野生型的泛素分子外,还表达一种N端带有亲和纯化的标签(比如多聚组氨酸或者生物 ...
#41. 蛋白质降解剂 - Bio-Techne
... 并且不具有细胞渗透性,然而它们证明了使用E3 连接酶降解靶蛋白的原理是可行的。 ... synthesis of inducers of ubiquitination-mediated degradation of cellular ...
#42. 使用泛素-蛋白酶体途径降解蛋白质 - 赛默飞
了解蛋白质降解途径的工作原理、关键酶的具体作用以及如何控制这种自然发生的细胞过程(例如靶向 ... a proteasomal inhibitor, have increased ubiquitin expression.
#43. 細胞自噬的機制與可能的臨床醫療應用-臺中醫林第94期
自噬作用更是重要的蛋白質降解途徑,其機制是不同於泛素蛋白酶體系統(Ubiquitin Proteasome System,UPS;此課題相關的研究獲頒2004年諾貝爾化學獎)。UPS是許多細胞的 ...
#44. 核糖体组蛋白的体外泛化和二次基质测定 - JoVE
(E) 实验工作流程的原理表。请点击此处查看此图的较大版本。 ... Role of histone H2A ubiquitination in Polycomb silencing. Nature.
#45. 今日医学 - 清华大学医学院
本次培训面向初级用户,侧重酵母表达系统实验技能方面,全面介绍实验原理,具体流程 ... Communications》期刊上在线发表了题为” K63-linked ubiquitination regulates ...
#46. Effects of inhibitor ubiquitin binding enzyme E2 on ...
Fruiting bodies of Volvariella volvacea were treated with ubiquitin binding enzyme E2 (UBEV2) inhibitor for improving the ... 植物生理生化试验原理和技术.
#47. 中山チーム 研究成果
生命システムの動作原理と基盤技術. ... Wei, W.: SCFFbw7 regulates cellular apoptosis by targeting the Mcl-1 oncoprotein for ubiquitination and destruction.
#48. In vitro ubiquitination assay
ユビキチン(ubiquitin)は進化的によく保存された 76 アミノ酸からなるタンパク質である。あるタンパク質のリジン残基がユビキチン分子との共有結合によって修飾され ...
#49. CN104155452A - 一种检测细胞内蛋白质降解的方法
... 小分子基团上,(3)在反应体系中直接利用均相时间分辨荧光共振原理(HTRF)对偶联了步骤(2)中可被识别的分子的目标蛋白进行定量,从而确定目标蛋白的降解速率。
#50. PROTAC开发中简便快速地分析蛋白泛素化 - TrioBio
泛素化(Ubiquitination)是最重要的蛋白翻译后修饰的调控机制之一,在真核细胞中普遍存在,参与调控蛋白稳定性、蛋白降解,以及膜 ... FIDA检测泛素化原理示意图。
#51. 蛋白质泛素化 - 中国大百科全书
泛素(ubiquitin; Ub)是一种广泛存在于真核生物中的序列高度保守的蛋白质,由76 ... ②生物酶法制备,主要原理是重组表达获取泛素生成酶E1、E2和E3,在体外重建泛素化 ...
#52. Signal-Seeker™ ユビキチン化タンパク質濃縮キット
2011. The E3 ubiquitin-ligase HACE1 catalyses the ubiquitination of active RAc1. Developmental Cell 21: 959-965. Jin L. et al. 2013. Epigallocatechin gallate ...
#53. 詹鴻霖的個人資料- 清華大學生命科學院
專任師資 · 教授 · 生物資訊與結構生物研究所/ 學士班/ 醫科系 · 訊號傳遞與癌症生物學、結構生物暨蛋白質體學、二維電泳與生物質譜分析、蛋白質體學原理與應用、高等生物化學 ...
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PROTAC的原理是利用雙靶點小分子藥物,一頭結合目標蛋白,一頭結合E3泛素 ... 酶會將目標蛋白接上泛素(ubiquitin)修飾,被泛素化(ubiquitination) ...
#56. 亲和分离在蛋白质泛素化修饰研究中的应用进展 - SciEngine
Abstract: Protein ubiquitination is one of the most ... 生命分离分析新原理和新方法为蛋白质泛素化.
#57. 基于蛋白质序列的泛素化位点预测研究进展
Progress in Prediction of Protein Ubiquitination Sites Based on the. Protein Sequence* ... 用统计学的相关原理。最后得到的p 值是将观测结果认为具有.
#58. Global Analysis of Ubiquitination - 实验方法- 丁香通
The covalent attachment of the small protein ubiquitin to other proteins is known to control a host of biological pathways and is emerging as an important ...
#59. 中山醫學大學生物醫學科學學系碩士論文
ubiquitination 催化區位,其可透過E2 將ubiquitin 轉移給E3,並直接由E3 來. 執行專一性受質的ubiquitination ... 原理與機制。當TET-CaCDC4/CaCDC4-F box/CaCDC4 ...
#60. teacher_lojengfan - 國立陽明交通大學口腔生物研究所
... 的同時表達中以EGFR 和ErbB2, 在口腔鱗狀上皮細胞癌 (OSCC) 發病原理上有直接地關連。 ... Glycosylation of tid1 regulates galectin-7 ubiquitination and ...
#61. PNAS | 茅毓新组发现非典型去泛素化酶 - 领研网
Recent studies unveiled an unconventional type of ubiquitination mediated by the SidE family of ... C)DupA/B工作原理的分子结构图。
#62. BaBPO5晶体晶格振动光谱研究与第一性原理计算 - 物理学报
通过偏振拉曼光谱和第一性原理计算对非线性光学晶体BaBPO5的晶格振动模式进行了研究. 实验得到了不同几何配置下、在1001600 cm-1范围内的晶体偏振拉曼光谱与傅里叶变换 ...
#63. 蛋白质的生物合成
蛋白质生物合成的抑制剂的作用原理 ... Polymeric ubiquitin chains usually target proteins ... •Ubiquitination may be reversed by de-ubiquitinases (DUBs).
#64. 107生化Flashcards - Quizlet
... 主要原理是因為His x 6 可與鎳( 或站) 金屬形成配位鍵結合在管柱中, ... ubiquitin 結合目標蛋白質的修飾作用稱為ubiquitination , 真核細胞中許多重要的調控蛋白 ...
#65. 透過靶向血管內皮細胞的機械敏感性蛋白TXNDC5以穩定eNOS ...
基本原理動脈彎曲和分叉處的擾流會激活內皮細胞,進而造成動脈粥狀硬化. ... 中重要的轉錄因子HSF1的泛素化(ubiquitination)以及蛋白酶體(proteasome)媒介的降解, ...
#66. 李明刚 - 生命科学学院- 南开大学
主讲博士和硕士研究生“高级分子遗传学”(南开大学精品课)、“植物基因操作原理与技术”和 ... Parkin regulates Eg5 expression by Hsp70 ubiquitination- dependent ...
#67. Re: [求救] IP的方法測Protein的ubiquitination - 看板Biotech
... protein ubiqutination的影響: 看paper幾乎都是以IP的方式來做: 原理大致上是把Target protein用抗體抓下來後: 然後在western上用Ub的antibody來 ...
#68. ユビキチン生物学研究室 | 大阪大学 大学院 生命機能研究科
あらゆる生物学的機能を操るユビキチンシステムの基本原理を解明する ... Site-specific ubiquitination of the E3 ligase HOIP regulates apoptosis and immune ...
#69. O-GlcNAc修饰对蛋白质泛素化降解途径的影响 - 生命科学
Both O-GlcNAcylation and ubiquitination are important post-translational modification. ... terminal hydrolase, UCH),其原理都是催化水解泛.
#70. 阿三教你——蛋白质降解的机制!Ubiquitination of Proteins ...
Ubiquitination of Proteins and Protein Degradation. 基因编辑宅男 ... 反向PCR( Inverse PCR) 的 原理 及使用场景Part1 Inverse PCR Explained.
#71. 台灣生物化學及分子生物學學會
隨著時間不會改變的原理,有一年到土耳其的以弗所旅行,導遊對著一片棉花 ... ubiquitination assay,証明TK1可以直接被APC/C complex泛素修飾的受質,我心想這真是有 ...
#72. 《生理學與生物化學》
一、請敘述疫苗免疫之原理。(10分). 二、請敘述肝臟的生理及代謝功能。(15分). 三、泛素化(ubiquitination)是細胞的一種自我管控蛋白質的手段,請說明其意義及 ...
#73. 國立中興大學九十七學年度校課程委員會第一次會議紀錄
森林系(木材科學組) 育林學原理. 加開「育林學原理」選修2學分,原只規劃於林學組開授. 森林系(木材科學組) 育林學及實習 ... 生醫所Ubiquitination與人類疾病特論.
#74. 生物化學試題准考證號碼 - 元培教務處
Ubiquitination 與下列何項敘述有關? (A)蛋白質降解(degradation) (B)胺基酸 ... 請描述三種純化蛋白質之方法及原理?6%. 3. 試說明DNA 的primary、 secondary ...
#75. 动植物中COP1泛素连接酶介导的信号转导与蛋白质稳态调控PDF
3 Schematic diagram of drug targets in ubiquitination process. (a)泛素-蛋白酶体系统及相关药物作用靶点和PROTAC药物作用原理示意图。
#76. TR-FRET法によりE3酵素における自己ユビキチン化を ...
Real-Time TR-FRET Ubiquitin Assay Kit #SBB-KF0036の測定原理 ... E3 Ligase TR-FRET Ubiquitination Kitは,独自のTR-FRETシステム(次項参照)で測定を行います。
#77. プロテアソーム:動作原理の解明と生理病態学研究 - KAKEN
[雑誌論文] Reactive oxygen species up-regulate expression of muscle atrophy-associated ubiquitin ligase Cbl-b in rat L6 skeletal muscle cells.2018 ...
#78. 搜尋結果 - 政府研究資訊系統GRB
其原理是於特定的時間差內反覆傳遞配對的周邊神經電刺激及穿顱磁刺激至運動皮質 ... 泛素聯接酶E3 (E3-ubiquitin ligase) 媒介的泛素化(ubiquitination) 為特定蛋白質 ...
#79. 碩士論文 - 政治大學
種為由泛素(Ubiquitin) 及蛋白酶(Proteasome) 所組成的泛素-蛋白酶分解系 ... 合產生冷光之原理,將PVDF membrane 浸置於冷光感應試劑enhanced ...
#80. 镧系元素时间分辨荧光共振能量转移检测 - PerkinElmer
的基本技术— 时间分辨荧光检测和FRET 检测的原理。并介绍 ... 图6:使用LANCE 受体APC 的检测原理 ... A high-throughput screen measuring ubiquitination of p53.
#81. 國立屏東大學108-109 學年度(含)及110 學年度特殊教育學校(班 ...
課程綱要/大綱、課程理論及教學原理,以規劃素養導向課程、教學及評量. 2.課程綱要/大綱、課程理論及教學 ... 3. sumoylation and ubiquitination. 4. acetylation.
#82. 蛋白质修饰之——泛素化修饰 - 翌圣生物
蛋白质的修饰有多种类型,除了常见的无机和有机小分子修饰,如磷酸化、糖基化、脂酰化等,还有一类用小肽进行修饰的,例如泛素化(ubiquitination),类泛素化NEDD ...
#83. PROTAC技術催生重磅新藥 - 環球生技月刊
PROTAC的原理是利用雙靶點小分子藥物,一頭結合目標蛋白,一頭結合E3泛素 ... 酶會將目標蛋白接上泛素(ubiquitin)修飾,被泛素化(ubiquitination) ...
#84. 111學年度碩士班招生考試試題 - 成功大學
(C) 泛素化(Ubiquitination)參與蛋白質分解機制;. (D) Lysosome 具proteases 可以分解胞內 ... 試說明目前兩種常用COVID-19 疫苗: AstraZeneca 與BNT 的作用原理?
#85. LZTR1 is a regulator of RAS ubiquitination and signaling - 简书
BioID是常用的相互作用蛋白研究工具。 其基本原理为将BirA进行R118G的点突变,使其丧失生物素化的选择性,可以令与之fusion蛋白空间 ...
#86. Recognizing Plant Cell authors: Fan-Nv Xia | Plantae
Fan-Nv Xia, first author of SINAT E3 Ubiquitin Ligases Mediate ... 三种途径各自的工作原理已经基本研究清楚,然而其间的交互对话则知之甚少。
#87. Degron——细胞蛋白的快速降解及可逆调控技术
本文综述了这一技术的原理和发展概况,并介绍了几种成熟的Degron 系统. ... Keywords:Degron;ubiquitin;protease;protein regulation.
#88. SMURF1 ELISA 试剂盒 - 产品细节 - antibodies-online
原理 : For the quantitative determination of mouse E3 ubiquitin-protein ligase SMURF1 ... Alias: KIAA1625, E3 ubiquitin ligase SMURF1|Smad ubiquitination ...
#89. 松褐天牛泛素基因的克隆及表达
Cloning and Expression of the Ubiquitin Gene of Monochamus alternatus. ... 对松褐天牛泛素基因的克隆,将有助于研究其细胞内的各种生理生化反应及其原理和细胞在 ...
#90. 跟著訊息傳遞走陳瑞華步步解開癌症的秘密——拜見科學界女力 ...
泛素化過程示意圖,寫有Ub的綠色圓形即為泛素(ubiquitin)。圖/By Rogerdodd at the English language ... 製作原理與方法. TCR-T 療法可謂「基因工程+數位科技」 ...
#91. 奈米技術在動物繁殖之應用 - 農業知識入口網
市面上亦已經有許多利用這些原理開發而來的疾病、生殖功能及生育率檢測 ... 之蛋白質失調,都會伴隨著精子表面產生泛素化(ubiquitination)的現象。
#92. 厦门大学博硕士论文摘要库 - CORE
The studies on the ubiquitination of WUS protein and WUS ... 3.1 酵母双杂交技术的原理. ... 2.1 The composition of ubiquitin-proteasome system .
#93. 2013-2014年“Basics in Becoming a Biologist”Series 课程安排
Date Speaker Host Place 9月25日 林圣彩 令怡 R205 10月16日 赵斌 李小玲 R205 10月23日 朱永群 黄春峰 R205
#94. 陳翰民老師 - 輔仁大學生命科學系
... sweet potato by phosphorylation and ubiquitination-proteasome mechanism. ... 陳翰民,經濟部工業局農業生計產業化技術推廣計畫培訓課程: 二次元電泳之原理與 ...
#95. O-propargyl-puromycin (OPP) | 用于检测蛋白合成
... DNA Damage/DNA Repair · PI3K/Akt/mTOR Signaling · Microbiology & Virology · Cell Cycle/Checkpoint · Ubiquitination/Proteasome · JAK/STAT Signaling ...
ubiquitination原理 在 Re: [求救] IP的方法測Protein的ubiquitination - 看板Biotech 的推薦與評價
補充一些可以考慮的點
※ 引述《shinchenboy (欣承男孩)》之銘言:
: 各位版友大大前輩們好
: 小弟最近實驗想探討在乳癌細胞中某non-coding RNA對於其
: Target protein ubiqutination的影響
: 看paper幾乎都是以IP的方式來做
: 原理大致上是把Target protein用抗體抓下來後
: 然後在western上用Ub的antibody來做hybridization
同前一篇 patricksky 大及其他人所言
你有用過這抗體先測試做 IP 或 WB 嗎?
理想狀態下
你應該要有兩隻對你的目標蛋白質具專一性且能用在 IP 與 WB 的抗體
然後拿一隻來做 IP 另一隻做 WB
: 所以小弟我的實驗設計也是仿照paper的模式
: 在MCF-7細胞建立Over-expression ncRNA及Control的Model後
: 隔天在收細胞前先以MG132(20uM)處理4h(也是參考paper的條件)
MG132 的使用需小心
首先 MG132加到培養基中會立刻結晶沉澱
要注意搖勻的問題
其次你有沒有做濃度與時間曲線
找出最適合你實驗的處理條件
最後
對某些蛋白質而言
加入 MG132反而會改變其表現
: 然後把細胞收下來後開始進行IP的實驗
: 我的實驗流程如下
: 1.先以RIPA buffer(sigma)冰上反應30min(每5min vortex 10s),然後離心後取
: 上清液
你有沒有加入 de-ubiquitinylating inhibitors?
例如 NEM, IAA, PR619等
沒加的話
Ub 會在實驗過程中喪失
你預期的 band 會消失
: 2.Protein定完量後,固定為800ug protein為一個IP,總體積200ul,並留80ug protein
: 作為Input(先煮好,保存於-80)
: 3.先讓Protein和G bead反應約6h,把會和G bead結合的protein分離出來
: 4.把剩下沒和G bead結合的protein加入抗體(1:100),4度C反應Overnight
: 5.隔天把G bead加進去,也是4度C反應Overnight
抗體與 beads 間有沒有做 cross-linking?
特別是你的蛋白質與泛素化後的蛋白質分子量是在一個尷尬的位置
IP 後如果抗體跟著蛋白質一起被洗出
WB 時你就會看到抗體的 band 了
: 6.隔天用磁座把G bead-Ab-protein complex分離出來,用wash buffer洗三次5min
你的 wash buffer 是什麼?
夠不夠 harsh?
這裡需要一個夠 harsh 的 wash buffer
把所有非專一結合的雜質蛋白質全洗出去
只留下你與抗體穩定結合的目標蛋白質
但要這樣做前提是你務必要做 cross-linking
: 7.加入sample buffer後煮10min
: 8.Western blot
: 然後現在結果出來了不太理想,有幾個問題
: 1.看paper Ub-protein沒有只是單一條band而已,譬如我的target protein分子量在43kD
~~~~~~~~~
這在說什麼?
: ,理論上來說它在接上Ub後band會出現在43kD的上方連續好幾條band,但是我的結果似乎
: pattern沒有和paper那麼像,只有兩條band,位置出現在50kD和70kD附近
: 2.我的Negative control抓到很多很奇怪的雜band,而且有兩條也在我預計想看的
: protein相同位置上
同 patricksky 所問, Negative control 是什麼?
你有沒有同時跑兩片 WB?
一片用你手上有專一性, 可辨認目標蛋白質的抗體跑
另一片用可辨認 Ub 的抗體如 FK1, FK2, P4D1 染
再來交叉比對 band 的位置
就可以推論出哪些 band 是有 Ub 的 band
: 跟老師和學長姐討論之後,認為那些band都不是我要看的,簡單來說就是有可能我的
: Ab沒有成功把target protein抓下來
: 目前我想到的解決方式有幾個
: 1.先用WB測試我的target protein 有沒有被Ab抓下來
基本一定要做的
: 2.提高IP反應Protein的量
不預期會有效果
: 3.外送Ub plasmid
: 想請問各位大大們還有甚麼其他意見嗎??? 感激不盡~
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